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大鼠腦靜脈血管組織提取物培養(yǎng)

大鼠腦靜脈血管組織提取物培養(yǎng)

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大鼠腦靜脈血管組織提取物培養(yǎng)

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     大鼠腦靜脈血管組織提取物培養(yǎng)腦組織是指包容在顱腔內(nèi)的三大塊神經(jīng)纖維組織:大腦、腦干和小腦。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠腦靜脈血管組織中高質(zhì)量的總RNA,PCR準備的*條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。

總RNA制備:利用Qiagen RNeasy KitTrizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結果等。        cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA*鏈,以50ul總反應體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及0mgRNA。68℃反應0min 后終止RT反應。利用x RT Buffer 運輸cDNA μl cDNA 足夠做一次PCR反應。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴格的QA/QC分析,保證產(chǎn)品的質(zhì)量。        蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 50mM NaCl, mM EDTA, mM EGTA, % NP-40 , mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人血管組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, % SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。        潛在的應用: <>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學;<6>芯片研究與表達圖譜。
培養(yǎng)步驟:
大鼠腦靜脈血管組織提取物培養(yǎng)對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細胞懸液按:2到:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按:2到:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按:2到:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。?

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大鼠腦靜脈血管組織提取物培養(yǎng)3-叔丁基-4-羥基茴香醚標準品   英文名稱3-tert-Butyl-4-hydroxyanisole   規(guī)格?。?00mg  CAS:2-00-6  進口、國產(chǎn)

甲基叔丁基醚標準品   英文名稱tert-Butylmethyl ether   規(guī)格?。?2ml×3ampules  CAS:634-04-4  進口、國產(chǎn)

羥苯丁酯標準品   英文名稱Butylparaben   規(guī)格?。?00mg  CAS:94-26-8  進口、國產(chǎn)

骨化二醇標準品   英文名稱Calcifediol   規(guī)格 :75mg  CAS:63283-36-3  進口、國產(chǎn)

卡角林標準品   英文名稱Cabergoline   規(guī)格?。?5mg  CAS:8409-90-7  進口、國產(chǎn)

標準品   英文名稱   規(guī)格?。?0mg  CAS:  進口、國產(chǎn)

雜質(zhì)標準品   英文名稱   規(guī)格 :20mg  CAS:  進口、國產(chǎn)

鈣三醇標準品   英文名稱   規(guī)格 :0mg  CAS:32222-06-3  進口、國產(chǎn)

溶液標準品   英文名稱Calcitriol Solution   規(guī)格?。?ml  CAS:32222-06-3  進口、國產(chǎn)

醋酸鈣標準品   英文名稱Calcium Acetate (AS)   規(guī)格?。篻  CAS:62-54-4  進口、國產(chǎn)

抗壞血酸鈣標準品   英文名稱Calcium Ascorbate   規(guī)格?。?00mg  CAS:5743-28-2  進口、國產(chǎn)

碳酸鈣標準品   英文名稱Calcium Carbonate (AS)   規(guī)格?。篻  CAS:47-34-  進口、國產(chǎn)

氯化鈣標準品   英文名稱Calcium Chloride (AS)   規(guī)格?。篻  CAS:0035-04-8  進口、國產(chǎn)

注意事項:
. 接收到大鼠腦靜脈血管組織提取物培養(yǎng),肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞00X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA-.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。 

 

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